血清总补体溶血活性（CH50）测定操作说明书

点击次数：8831 日期：2018/7/6 12:37:36

血清总补体溶血活性（CH50）实验原理

利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。

本试验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。

1．试剂及配制

(1)缓冲生理盐水：

①贮存液：

lNa2HPO4•12H2O 2.85g

lKH2PO4 0.27g（加蒸馏水至100毫升，4℃保存）

lNaCl 17.00g

②应用液（缓冲液）：5毫升贮存液加95毫升蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1毫升。当日配制。12小时内使用。

（2）2%绵羊红细胞（From：南京森贝伽生物公司）：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。

(3)冻干绵羊红细胞溶血素（From：南京森贝伽生物公司）（规格：0.5ml/瓶，0.5ml蒸馏水复溶）：将本品（效价1：4000），用缓冲液作1：2000倍稀释（即0.5ml溶血素加999.5毫升缓冲液）。

(4)待测血清：新鲜血液室温放置30分钟，再4℃放置60分钟，使血块收缩。4℃离心（3000r/min）10分钟，取上清，-20℃保存。

2.试管法操作步骤（改良Mayer法）

（1）致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1：2000），混匀，置37℃水浴30分钟。

（2）稀释血清：待测血清0.2ml，加缓冲液3.8ml，稀释度为1：20。

（3）配制溶血标准管：2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀，即为全溶血管。取全溶血管液2ml加缓冲液2ml，即为50%溶血管。

（4）按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30分钟。第10管为非溶血对照。

补体CH50测定试管法

成分	试管号
成分	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
1：20待测血清	0.10	0.15	0.20	0.25	0.30	0.35	0.40	0.45	0.50	-
缓冲液(ml)	1.40	1.35	1.30	1.25	1.20	1.15	1.10	1.05	1.00	1.50
致敏红细胞（ml）	1	1	1	1	1	1	1	1	1	1

（5）结果测定：取出试管，2000r/min离心10分钟，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长542nm、0.5cm比色杯）OD值，确定与标准管最接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：血清补体CH50（U/ml）=（1/血清用量）×稀释度。

如第5管为终点管，测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。