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Bradford法蛋白定量试剂盒说明书

点击下载日期:2014/2/12 9:00:40

一、Bradford法蛋白定量试剂盒简介
目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是:BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法与传统方法相比,更简单、更稳定、兼容性更好。
Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响, 故在用Bradford Protein Assay Kit进行蛋白定量的时候,需确保SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20, 60, 80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量,建议采用Leagene BCA Protein Assay Kit。
Leagene Bradford Protein Assay Kit检测速度很快,少量样品一般只需10min即可完成检测。检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1~20μl。在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
二、Bradford法蛋白定量试剂盒组成
试剂(A): G250染色液 100m 200ml 4℃ 避光
试剂(B): 蛋白标准(BSA 5mg/ml) 1ml 2ml -20℃
Bradford法蛋白定量试剂盒主要成分:
试剂(A): 主要由G250、缓冲液等组成。
试剂(B): 主要由牛血清白蛋白(BSA)、防腐剂等组成。
三、自备材料
1、 酶标仪或分光光度计 2、 微量移液器 3、 双蒸水 4、 96孔板
操作步骤(仅供参考):
1、 完全溶解蛋白标准(BSA 5mg/ml),按蛋白标准:稀释液=1:9进行稀释,如取蛋白标准10μl稀释溶解于稀释液90μl,使终浓度为0.5mg/ml。注意,蛋白样品在什么溶液中,蛋白标准也宜用什么溶液稀释。也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准(BSA 5mg/ml)。
2、 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白标准孔中,加蛋白标准稀释
液补足到20μl。
3、 加适当体积样品到96孔板的样品孔中,补加标准品稀释液到20μl。
4、 各孔加入200μl G250染色液,室温放置3~5min。
5、 用酶标仪测定A595,或560~610nm之间的其它波长的吸光度。
6、 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
四、Bradford法蛋白定量试剂盒操作注意事项
1、 G250染色液使用前充分混匀。
2、 G250染色液回复至室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。
3、 蛋白标准在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。
4、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。
5、 需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台,最佳检测波长为595nm,并需96孔板。
6、 建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
7、 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但测定时,考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积,样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
8、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 12个月有效。
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