TBD灏洋 LDS1075 人全血单个核细胞分离液（FICOLL配置）说明书

TBD灏洋 LDS1075人全血单个核细胞分离液(FICOLL配置)说明书

人全血单个核细胞分离液【包装规格】

200ml/瓶

【实验前准备】

A． 适用仪器

最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

B． 耗材

人全血单个核细胞分离液【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。 首先根据样本量大小，分以下几种情况：

一、 使用 15ml 离心管时：

情况 A：血液样本量小于 3ml 时，实验方法如下：

1. 取一支 15ml 离心管，加入 3ml 分离液。

2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心 20-30min（注：根据血 液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件 需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个 核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管 中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5. 250g，离心 10min。

6. 弃上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8. 250g，离心 10min。

9. 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。 情况 B：血液样本量为 3-6ml 时，实验方法如下：

1. 取一支 15ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心 20-30min（注：根据血 液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件 需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1000g）。

3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个 核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管 中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5. 250g，离心 10min。

6. 弃上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8. 250g，离心 10min。

9. 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。 二、 使用 50ml 离心管时：

情况 A：血液样本量为 6-10ml 时，实验方法如下：

1. 取一支 50ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-950g，离心 20-30min（注：根据血 液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件 需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。

3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个 核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管 中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5. 250g，离心 10min。

6. 弃上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8. 250g，离心 10min。

9. 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。 情况 B：血液样本量为 10-20ml 时，实验方法如下：

1. 取一支 50ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，650-110g，离心 20-30min（注：根据血 液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件 需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。

3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色单个 核细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

4. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色单个核细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管 中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

5. 250g，离心 10min。

6. 弃上清。

7. 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

8. 250g，离心 10min。

9. 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

人全血单个核细胞分离液【注意事项】

1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果， 最好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

2. 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。

3. 吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的 粒细胞数量增加。

4. 吸取过多的单个核细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。

5. 如所实验后细胞得率或活性过低，请联系天津灏洋技术支持以寻求帮助，具体联系方式 详见下方生产企业信息。

6. 当血液样本粘度过高需稀释时，最优稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：

2010C1119）1:1 稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样

本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。

【储存条件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】 本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

【相关实验技术方案】

1. 所获得淋巴细胞的培养技术。

2. 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。

3. 所获得淋巴细胞的鉴定方法 A.流式细胞技术 B.免疫组化技术 C.原位杂交技术

D.PCR 技术 注：上述技术方案详情请登陆本公司官网：www.tbdscience.com，搜索“天津灏洋细胞 分离、纯化、扩增及鉴定指导手册”，并在说明书项目栏下下载使用。

【可能存在的问题及解决方法】

1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：

2. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地