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解决方案
抗体如何选择
点击次数：1825 日期：2014/3/12 13:28:46
检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：
一、分析试验的应用类型
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用 某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
二、 样本蛋白的结构性质
了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑：
1. 待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
2. 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。
三、样本的物种
应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。
四、一抗宿主物种的选择
一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的 一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。
抗体的品质高低最终还是需要通过实验结果来呈现的，但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的，无论进口还是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品，不同品牌之间，甚至同一品牌的不同产品之间，抗体品质差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择，但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的，所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体品质障碍时，能够确保有效地解决问题，不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验，可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。
在价格方面，需要谨记，最贵的不一定就是最好的，最适合你的实验的才是最好的。花很多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的，不买贵的。在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，要综合考虑。在规格方面，根据最终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的实验而言，过大的包装有时会造成很大的浪费。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相继推出小包装的抗体，这在一定程度上给选择者更大的选择自由度，可以根据使用产品的效价，计算出自己实际需要的抗体量，做到精确定量采购。
一、分析试验的应用类型
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用 某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
二、 样本蛋白的结构性质
了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑：
1. 待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
2. 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。
三、样本的物种
应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。
四、一抗宿主物种的选择
一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的 一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。
抗体的品质高低最终还是需要通过实验结果来呈现的，但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的，无论进口还是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品，不同品牌之间，甚至同一品牌的不同产品之间，抗体品质差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择，但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的，所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体品质障碍时，能够确保有效地解决问题，不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验，可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。
在价格方面，需要谨记，最贵的不一定就是最好的，最适合你的实验的才是最好的。花很多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的，不买贵的。在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，要综合考虑。在规格方面，根据最终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的实验而言，过大的包装有时会造成很大的浪费。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相继推出小包装的抗体，这在一定程度上给选择者更大的选择自由度，可以根据使用产品的效价，计算出自己实际需要的抗体量，做到精确定量采购。
