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解决方案
MTT法及台盼兰拒染法活细胞增值检测服务
点击次数：2283 日期：2013/11/29 13:25:21
一、技术服务简介
噻唑蓝（MTT）和台盼蓝拒染法是判别细胞活性最常用的两种方法，MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
二、服务范围
应用MTT法检测细胞活性或体外药物对细胞增殖活性的影响。
三、收费标准
询价
四、服务周期
实验费用以样本数和细胞株的种类数目计算。实验周期为2~3个星期左右。
五、客户须知
1. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用特快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安全可靠。
2. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户：实验报告书，包括IC50、实验试剂与设备、实验过程、结果说明、原始数据、细胞图片等
3. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
六、实验服务咨询及技术支持
公司：南京森贝伽生物科技有限公司
电话：025-66915470
手机：18602534620
传真：025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
七、技术步骤
1. 接种细胞：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000~10000孔，边缘孔用无菌PBS填充。
2. 细胞培养：5% CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）。
3. 药物处理：加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5~7个梯度，每孔100ul，设3~5个复孔。
4. 呈色：5% CO2，37℃孵育16~48小时，倒置显微镜下观察。每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5% MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2~3遍后，再加入含MTT的培养液。
5. 溶解：终止培养，小心吸去孔内培养液。对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
6. 比色：在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。
噻唑蓝（MTT）和台盼蓝拒染法是判别细胞活性最常用的两种方法，MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
二、服务范围
应用MTT法检测细胞活性或体外药物对细胞增殖活性的影响。
三、收费标准
询价
四、服务周期
实验费用以样本数和细胞株的种类数目计算。实验周期为2~3个星期左右。
五、客户须知
1. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用特快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安全可靠。
2. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户：实验报告书，包括IC50、实验试剂与设备、实验过程、结果说明、原始数据、细胞图片等
3. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
六、实验服务咨询及技术支持
公司：南京森贝伽生物科技有限公司
电话：025-66915470
手机：18602534620
传真：025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
七、技术步骤
1. 接种细胞：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000~10000孔，边缘孔用无菌PBS填充。
2. 细胞培养：5% CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）。
3. 药物处理：加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5~7个梯度，每孔100ul，设3~5个复孔。
4. 呈色：5% CO2，37℃孵育16~48小时，倒置显微镜下观察。每孔加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5% MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2~3遍后，再加入含MTT的培养液。
5. 溶解：终止培养，小心吸去孔内培养液。对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
6. 比色：在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。
