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解决方案
流式细胞检测技术服务
点击次数：5269 日期：2013/11/8 8:58:46
一、流式细胞检测简介
流式细胞检测又称荧光激活细胞分选法，一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞，用激光束激发单行流动的细胞，根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。
二、实验服务项目
(1)细胞周期细胞 （2）细胞凋亡 (3)免疫细胞分型 (4)表面抗原鉴定 (5)细胞内钙离子检测 (6)线粒体功能 (7)细胞分选
2、样本及来源：
1) 单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
三、客户提供
（1）标本: 组织、细胞、全血（抗凝）
（2）抗体（荧光素标记）
PE最强，适用于弱表达抗原
FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广
biotin-avidin不适合弱抗原的检测
（3）其他试剂（如Fluo-3）
（4）染色试剂盒
客户得到：满意的流式细胞仪检测报告和实验报告。
四、注意事项：
1、 实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。
2、 送检样本量：
1)、单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。
4、 本实验室在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
5、 用户须一次性全额预付实验费。
6、 部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
7、 由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
8、 请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。
9、 请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。
五、流式细胞术检测样品推荐制备方法：
A.直接标记抗体（FITC标记抗体）：
(1)、收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2)、用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2mlPBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
(3)、用1ml含5%人血清的PBS重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200μl含0.5%BSA和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20μl抗体)的PBS,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200μl1%多聚甲醛固定，待测即可。
(4)、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10000个细胞。
B.未标记抗体间接免疫荧光标记法：
(1)、收集2×106个细胞，用冷的PBS2ml洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
(2)、用2ml4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2mlPBS重悬细胞，800rpm离心5min；
(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
(5)、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
(7)、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10000个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
(1)、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。
(2)、用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
(3)、调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)、PI染液终浓度为50微克/毫升，RNaseA终浓度为20微克/毫升。
六、如有任何疑问，详情请电话或 E-mail 咨询
公司：南京森贝伽生物科技有限公司
电话：025-66915470
传真： 025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
流式细胞检测又称荧光激活细胞分选法，一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞，用激光束激发单行流动的细胞，根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。
二、实验服务项目
(1)细胞周期细胞 （2）细胞凋亡 (3)免疫细胞分型 (4)表面抗原鉴定 (5)细胞内钙离子检测 (6)线粒体功能 (7)细胞分选
2、样本及来源：
1) 单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
三、客户提供
（1）标本: 组织、细胞、全血（抗凝）
（2）抗体（荧光素标记）
PE最强，适用于弱表达抗原
FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广
biotin-avidin不适合弱抗原的检测
（3）其他试剂（如Fluo-3）
（4）染色试剂盒
客户得到：满意的流式细胞仪检测报告和实验报告。
四、注意事项：
1、 实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。
2、 送检样本量：
1)、单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。
4、 本实验室在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
5、 用户须一次性全额预付实验费。
6、 部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
7、 由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
8、 请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。
9、 请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。
五、流式细胞术检测样品推荐制备方法：
A.直接标记抗体（FITC标记抗体）：
(1)、收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2)、用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2mlPBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
(3)、用1ml含5%人血清的PBS重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200μl含0.5%BSA和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20μl抗体)的PBS,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200μl1%多聚甲醛固定，待测即可。
(4)、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10000个细胞。
B.未标记抗体间接免疫荧光标记法：
(1)、收集2×106个细胞，用冷的PBS2ml洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
(2)、用2ml4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2mlPBS重悬细胞，800rpm离心5min；
(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
(5)、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
(7)、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10000个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
(1)、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。
(2)、用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
(3)、调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)、PI染液终浓度为50微克/毫升，RNaseA终浓度为20微克/毫升。
六、如有任何疑问，详情请电话或 E-mail 咨询
公司：南京森贝伽生物科技有限公司
电话：025-66915470
传真： 025-52797049
E-mail：senbeijia@163.com
